Một,Máy tổng hợp polypeptide tự độngChuẩn bị và hiệu chuẩn thiết bị

Cài đặt&gỡ lỗi

Việc lắp đặt và vận hành thiết bị được thực hiện bởi các kỹ thuật viên chuyên nghiệp để đảm bảo thiết bị có thể hoạt động chính xác.

Kiểm tra xem bình chứa dung môi có được kết nối tốt với đường ống dẫn khí hay không và các bộ phận của thiết bị có còn nguyên vẹn hay không.

Bật công tắc nguồn tổng hợp và công tắc khí nén để kiểm tra áp suất phù hợp với phạm vi (chẳng hạn như áp suất đồng hồ đo "AIR" lớn hơn 60psi và nhỏ hơn 100psi; Áp suất đo "N2" lớn hơn 5psi và nhỏ hơn 10psi).

Hiệu chuẩn&Thử nghiệm

Hiệu chuẩn và thử nghiệm thiết bị theo hướng dẫn của nhà sản xuất, đảm bảo rằng tất cả các hệ thống (như bơm, van, máy dò, v.v.) hoạt động bình thường.

Thực hiện kiểm tra nhiệt độ, mã vạch, khuấy trộn lò phản ứng, lấy kim lỏng, đẩy chai axit amin; Kiểm tra van điện từ; Hiệu chuẩn dòng chảy của chai thuốc thử hóa học và chai axit amin; Hiệu chuẩn điều khiển UV.

Chọn bình phản ứng thích hợp

Chọn thùng phản ứng phù hợp theo quy mô tổng hợp và đảm bảo rằng vật liệu của thùng chứa không phản ứng với chất phản ứng hoặc dung môi.

II. Chuẩn bị thuốc thử và vật liệu

Chuẩn bị thuốc thử

Chuẩn bị axit amin cho tổng hợp, thuốc thử kích hoạt, dung môi, v.v., đảm bảo tất cả các vật liệu đều tươi và tinh khiết để tránh sự ra đời của tạp chất.

Cân theo tỷ lệ chất mong muốn, đảm bảo độ chính xác, theo sơ đồ tổng hợp.

Đem thuốc thử lần lượt bỏ vào trong các bình chứa dịch có dán nhãn tương ứng.

Chuẩn bị nhựa

Nhựa được thêm vào máy tổng hợp pha rắn, làm căng nó bằng dung môi thích hợp, chẳng hạn như DCM, và sau đó được bơm khô.

Sử dụng dung môi như DMF để rửa nhựa để loại bỏ các tạp chất và rút khô dự phòng sau khi rửa xong.

III. Hoạt động tổng hợp

Đặt điều kiện phản ứng

Thiết lập các điều kiện phản ứng phù hợp dựa trên trình tự và chiều dài của polypeptide mong muốn, bao gồm nhiệt độ, áp suất, thời gian, v.v.

Thoát khỏi bảo vệ

Nhóm bảo vệ của axit amin trước đó được loại bỏ để nó có thể phản ứng với axit amin tiếp theo.

Ví dụ, giải pháp 40% axit trifluoroacetic/dichloromethane được khử bảo vệ, sau đó được rửa bằng dichloromethane, methanol, v.v.

Liên kết

Liên kết các axit amin mới với các axit amin đã được khử bảo vệ để tạo thành các liên kết peptide.

Axit amin đầu tiên (thường bắt đầu từ đầu C) được hòa tan với một lượng DMF nhất định và các chất ngưng tụ (như DCC, HBTU, v.v.) được thêm vào để kích hoạt.

Dung dịch axit amin kích hoạt được đưa vào máy tổng hợp pha rắn, bổ sung DMF đến nồng độ phản ứng thích hợp, khuấy để phản ứng ngưng tụ.

giặt rửa

Rửa sạch các chất và sản phẩm phụ không phản ứng, đảm bảo độ tinh khiết của phản ứng.

Sau mỗi bước tổng hợp hoàn thành, nó là cần thiết để loại bỏ các sản phẩm phụ từ phản ứng và nguyên liệu thô không phản ứng bằng cách rửa, giảm sự tích tụ tạp chất.

Lặp lại bước

Lặp lại các bước deprotection và ghép nối cho đến khi chuỗi polypeptide đạt đến độ dài xác định trước.

IV. Cắt và làm sạch sản phẩm

Nhựa nứt

Cấu hình dung dịch nứt (thường chứa axit mạnh như TFA) và bảo quản lạnh trong tủ đông phía trước.

Nhựa peptide được thêm vào nồi phản ứng, dung dịch lysis được làm lạnh trước được thêm vào và phản ứng được khuấy để tách polypeptide ra khỏi nhựa.

Chất lỏng phản ứng được giải phóng sau khi quá trình cracking kết thúc, và nhựa được bơm ra để loại bỏ và rửa bằng dung môi như TFA.

Tinh khiết polypeptide

Chuyển chất lỏng nứt vào máy bay hơi quay ở nhiệt độ phòng để cô đặc thành một thể tích nhỏ.

Polypeptide được kết tủa bằng cách sử dụng các chất kết tủa thích hợp như methyl tert-butyl ether và các peptide thô được tạo ra thông qua các bước như ly tâm, rửa.

Peptide thô được tinh chế bằng cách sử dụng các phương pháp như sắc ký lỏng hiệu quả cao (HPLC) để loại bỏ tạp chất và cô lập polypeptide mục tiêu.

Tập trung, lọc và đông khô

Dung môi hữu cơ được loại bỏ bằng spin hấp dung dịch polypeptide tinh khiết để thu được dung dịch polypeptide cô đặc.

Dung dịch polypeptide cô đặc được lọc vô trùng.

Đặt dung dịch polypeptide lọc trong máy sấy lạnh, thiết lập quy trình làm nóng thích hợp để xử lý đông khô.

V. Kiểm soát chất lượng và hồ sơ

Giám sát quá trình phản ứng

Quá trình phản ứng được giám sát bằng các phương pháp phát hiện thích hợp, chẳng hạn như phát hiện tia cực tím, phân tích phổ khối, v.v., đảm bảo rằng phản ứng ở mỗi bước diễn ra như mong đợi.

Hồ sơ&Báo cáo

Các thông số hoạt động và kết quả của mỗi bước được ghi lại chi tiết, bao gồm lượng thuốc thử được sử dụng, thời gian phản ứng, nhiệt độ, áp suất, v.v.

Tạo báo cáo thí nghiệm tóm tắt thông tin như dữ liệu quan trọng và độ tinh khiết của sản phẩm trong quá trình tổng hợp.